CD47为慢病毒载体披上隐形衣 或助肝靶向基因疗法逃脱先天免疫(2)

2019-08-07  未知 admin

整合CD47到慢病毒，逃避免疫从而提高效率

研究通过瞬时转染过表达CD47，构建了先前报道中的LV稳定生产细胞系和293T细胞，用于LV生产。为此，研究人员用CD47表达的自失活γ逆转录病毒载体(SIN RVs)转导这些细胞。

在293T细胞和LV生产细胞系(CD47hi细胞)的细胞表面上实现了CD47蛋白稳定10至30倍的过表达。由CD47hi细胞产生的LV在对照293T细胞上具有与亲本细胞产生的载体相当的滴度和感染性，并且通过电子显微镜显示CD47的免疫染色显著增加(P<0.0001)。

LV表面上CD47的量不影响包膜蛋白- 水泡性口炎病毒蛋白G(VSV.G)的存在，与CD47hi LV的未改变的感染性一致。当CD47hi和对照LV与巨噬细胞系或原代人巨噬细胞一起孵育时，发现CD47hi LV的摄取显著降低(P=0.0303)，其达到对照293T细胞中观察到的基础水平。相反，人巨噬细胞对无CD47LV的摄取显著高于对照LV(P=0.0083)。

这些数据表明，调节LV颗粒上CD47的量可以影响人巨噬细胞对它们的摄取。

在NOD小鼠的体内研究中，CD47hi LV表现出对吞噬作用和先天免疫激活的易感性降低；活体成像显示，CD47调节KCs(库弗氏细胞)对LV吞噬作用的速率和程度。

NHPs是最接近人类的模型，和人类之间SIRP-α和CD47的序列同源性分别为94%和99%。因此，下一步研究选择恒河猴作为受试者，因为与其他NHP物种相比，对HIV感染的限制较低。

他们证明，LVs向NHP的体内施用(静脉注射)是安全且耐受良好的，并且表明CD47hi LV对先天免疫系统的活化减少，并且进一步增加肝细胞基因转移。

尽管全基因组LV整合必然意味着对延迟的肿瘤发生的担忧，但该研究结果显示在NHP中没有LV转导的肝细胞或肝肿瘤扩张的迹象，尽管存在治疗个体数量和观察时间的固有限制。NHP肝脏和脾脏中的LV IS分析显示出不同的组成，几乎所有独特的IS由1-4个基因组代表，表明没有发生克隆扩增，并且与处理的NHP中大多数肝细胞预期的低至无增殖率一致。

此外，迄今为止，在几项临床试验中，LV转导的造血干细胞(HSCs)或T细胞治疗的数百名患者中，没有任何关于插入性肿瘤发生的证据，这包括对最早接受治疗的患者随访10年以上。鉴于HSC对致癌转化的敏感性可能高于肝细胞，这些发现令人放心，并支持LV设计、IS选择和多克隆重建都有助于减轻这种风险的说法。

研究小组补充说，整合CD47可以降低所需的LV剂量，从而缓解制造需求，并降低副作用的可能性。

参考出处：

https://www.fiercebiotech.com/research/improving-viral-vectors-for-hemophilia-gene-therapies-by-tricking-immune-system

https://stm.sciencemag.org/content/11/493/eaav7325